HPLC: hoe ontstaat een zuiverheidspercentage?

Wat er in het apparaat gebeurt

HPLC staat voor high-performance liquid chromatography. Een pomp perst de mobiele fase onder hoge druk door een kolom die is gevuld met zeer kleine deeltjes, typisch 3 tot 10 micrometer. Het monster wordt in de vloeistofstroom geïnjecteerd en scheidt zich in de kolom in zijn bestanddelen.

Aan het eind meet een detector wat er uit de kolom komt. Veel gebruikt is een detector die meet hoeveel licht de vloeistof absorbeert. Het resultaat is een chromatogram: een grafiek met pieken over de tijd.

Bronnen: [1]

Van pieken naar een getal

Elke piek hoort bij één of meer stoffen. Het oppervlak onder een piek hangt samen met hoeveel van die stof de detector heeft gezien.

Een veelgebruikte manier om zuiverheid uit te drukken is het oppervlak van de hoofdpiek te delen door het totale oppervlak van alle pieken. Is de hoofdpiek 98% van het totale piekoppervlak, dan rapporteert men ‘98% (oppervlakte)’.

Bronnen: [1]

Wat het percentage níét meet

Oppervlakte-% is geen gewichts-%. Verschillende stoffen geven bij dezelfde hoeveelheid niet hetzelfde signaal: een verontreiniging die weinig licht absorbeert, lijkt kleiner dan ze is, of wordt helemaal gemist. Om echte hoeveelheden te bepalen, kalibreert een lab met standaarden van bekende concentratie.

Wat tegelijk met de hoofdpiek uit de kolom komt, valt onzichtbaar mee in die piek. En een HPLC-percentage zegt niets over wat de hoofdpiek ís. Daarvoor is een identiteitsmeting nodig, bijvoorbeeld door een massaspectrometer achter de HPLC te koppelen.

Bronnen: [1] [2]

Drie vragen bij elk percentage

Welke methode en welke detector zijn gebruikt? Is het oppervlakte-% of gewichts-%? En is de identiteit van de hoofdpiek apart vastgesteld?

Gerelateerde onderwerpen

• Wat is chromatografie?
• Massaspectrometrie: wat weegt een molecuul?
• Wat zegt een analysecertificaat?
• Waarom heeft elke meting onzekerheid?